Nov komplet za odkrivanje nukleinske kisline koronavirusa (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurudascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Nov komplet za odkrivanje nukleinske kisline (SARS-Cov-2) (metoda fluorescentne sonde RT-PCR)
【Packaging specčecations 】25 testov/komplet
【Intended usstarost】
Ta komplet se uporablja za kvalitativno odkrivanje nukleinske kisline novega koronavirusa v nazofaringealnih brisih, brisih orofaringeusa (žrela), brisih prednjega dela nosu, brisih srednje turbinate, nosnih izpiranjih in nosnih aspiratih posameznikov, pri katerih zdravstveni delavec sumi na COVID19. Detekcija genov ORF1ab in N novega koronavirusa se lahko uporablja za pomožno diagnostiko in epidemiološko spremljanje okužbe z novim koronavirusom.
【Principles of the procedure 】
Ta komplet je zasnovan za posebne sonde TaqMan in posebne primerje, zasnovane za genska zaporedja ORF1ab in N novega koronavirusa (SARS-Cov-2). Reakcijska raztopina PCR vsebuje 3 sklope specifičnih primerjev in fluorescenčnih sond za specifično detekcijo tarč, dodaten niz specifičnih primerjev in fluorescenčnih sond pa se uporablja kot interna standardna kontrola kompleta za detekcijo endogenih gospodinjskih genov.
Načelo preskusa je, da se specifična fluorescentna sonda prebavi in razgradi z eksonukleazno aktivnostjo encima Taq v reakciji PCR, tako da sta reporterska fluorescenčna skupina in ugasnjena fluorescenčna skupina ločeni, tako da lahko sistem za spremljanje fluorescence prejme fluorescentno signal, nato pa z obogatitvenim učinkom pomnoževanja PCR fluorescenčni signal sonde doseže nastavljeno mejno vrednost – vrednost Ct (prag cikla). V primeru, da ciljnega pomnožka ni, je reporterska skupina sonde blizu skupine za dušenje. V tem času pride do fluorescenčnega resonančnega prenosa energije in fluorescenco reporterske skupine ugasne dušilna skupina, tako da fluorescentnega signala ni mogoče zaznati s fluorescentnim PCR instrumentom.
Za spremljanje uporabe reagentov med testom je komplet opremljen s pozitivnimi in negativnimi kontrolami: pozitivna kontrola vsebuje rekombinantni plazmid ciljnega mesta, negativna kontrola pa je destilirana voda, ki se uporablja za spremljanje onesnaženosti okolja. Pri testiranju je priporočljivo nastaviti pozitivno in negativno kontrolo hkrati.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Components | |
| imee | specifikacija | Količinanost | Količinanost | |
| Pozitivna kontrola | 180 μL/vialo | 1 | 1 | Umetno zgrajeni plazmidi, destilirana voda |
| Negativna kontrola | 180 μL/vialo | 1 | 1 | Destilirana voda |
| Mešanica SARS-Cov-2 | 358,5 μl/vialo | 1 | / | Specifični pari primerjev, specifične detekcijske fluorescenčne sonde, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilirana voda itd. |
| Encimska mešanica | 16,5 μL/vialo | 1 | / | Encimi Taq, reverzna transkriptaza, encimi UNG itd. |
| Mešanica SARS-Cov-2 (liofilizirana) | 25 testov/vialo | / | 1 | Specifični pari primerjev, specifične detekcijske fluorescenčne sonde, dNTP, encimi Taq, reverzna transkriptaza, destilirana voda itd. |
| 2x pufer | 375 μL/vialo | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilirana voda itd. |
Opomba:( 1) Komponent v različnih serijskih kompletih ni mogoče mešati ali zamenjati.
(2) Pripravite svoj reagent: komplet za ekstrakcijo nukleinske kisline.
【Storage conditions in expiration date 】
For BST-SARS-25:Prevažajte in hranite pri -20±5℃ za dolgo časa.
For BST-SARS-DR-25:Transport pri sobni temperaturi. Hraniti pri -20±5℃ za dolgo časa.
Izogibajte se ponavljajočim se ciklom zamrzovanja in odmrzovanja. Obdobje veljavnosti je okvirno določeno na 12 mesecev.
Za datum izdelave in uporabe glejte nalepko.
Po prvem odprtju lahko reagent shranjujete pri -20±5 °C največ 1 mesec ali do konca obdobja reagenta, kar koli od datuma nastopi prej, da se izognete ponavljajočim se ciklom zamrzovanja in odmrzovanja ter številu zamrznitev reagenta -cikli odmrzovanja ne smejo biti daljši od 6-krat.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Veljavna vrsta vzorca: ekstrahirana raztopina nukleinske kisline.
2. Shranjevanje in transport vzorcev: Shranjujte pri -20 ± 5 ℃ 6 mesecev. Vzorce zamrznite in odmrznite največ 6-krat.
【Tocenaing method】
1.Nucleic acid extraction
Izberite primeren komplet za ekstrakcijo nukleinske kisline za ekstrakcijo virusne nukleinske kisline in sledite ustreznim navodilom kompleta. Priporočljivo je, da uporabite komplet za ekstrakcijo in čiščenje nukleinske kisline, ki ga proizvaja Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd., ali enakovredni komplet za čiščenje nukleinske kisline.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
( 1) Odstranite mešanico SARS-Cov-2 in encimsko mešanico, popolnoma stopite pri sobni temperaturi, temeljito premešajte z napravo Vortex in nato na kratko centrifugirajte.
(2) 16,5 uL encimske mešanice smo dodali 358,5 uL SARS-Cov-2 mešanice in temeljito premešali, da smo dobili mešano reakcijsko raztopino.
(3) Pripravite čisto 0,2 ml oktalno epruveto za PCR in jo označite s 15 uL zgornje mešane reakcijske raztopine na vdolbino.
(4) Dodajte 15 μL prečiščene raztopine nukleinske kisline, pozitivno kontrolo in negativno kontrolo ter previdno pokrijte pokrov oktalne epruvete.
(5) Dobro premešajte tako, da obrnete na glavo in hitro centrifugirate, da koncentrirate tekočino na dnu epruvete.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) Dodajte 375 ul 2x pufra v mešanico SARS-Cov-2 ((liofilizirano), da pripravite reakcijsko mešanico. Temeljito premešajte s pipetiranjem in nato na kratko centrifugirajte. (Ko je reakcijska mešanica pripravljena, je priporočljivo, da jo hranite pri -20 ℃ pri dolgotrajno shranjevanje.)
(2) Pripravite čisto 0,2 ml PCR oktalno epruveto in jo označite s 15 μL reakcijske mešanice na vdolbinico.
(3) Dodajte 15 μl prečiščene raztopine nukleinske kisline, pozitivno kontrolo in negativno kontrolo ter previdno pokrijte pokrov oktalne epruvete.
(4) Dobro premešajte tako, da obrnete na glavo in hitro centrifugirate, da koncentrirate tekočino na dnu epruvete.
3. PCR amplification （Za nastavitve delovanja glejte priročnik instrumenta.）
3. 1 Epruveto PCR 8 postavite v komoro za vzorce fluorescenčnega instrumenta PCR in nastavite vzorec za testiranje, pozitivno kontrolo in negativno kontrolo v skladu z vrstnim redom nalaganja.
3.2 Kanal za zaznavanje fluorescence:
( 1) Gen ORF1ab izbere kanal zaznavanja FAM (Poročevalec: FAM, dušilec: Brez).
(2) Gen N izbere kanal zaznavanja VIC (Poročevalec: VIC, dušilec: Brez).
(3) Notranji standardni gen izbere kanal za odkrivanje CY5 (Poročevalec: CY5, dušilec: Brez).
(4) Pasivna referenca je nastavljena na ROX.
3.3 Nastavitev parametrov programa PCR:
| korak | Temperatura (℃) | Čas | Število ciklov | |
| 1 | Reakcija povratne transkripcije | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Aktivacija encima Taq | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Aktivacija encima Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Podaljšanje žarjenja in pridobivanje fluorescence | 55 | 30 s | ||
Po nastavitvi shranite datoteko in zaženite reakcijski program.
4.Results analysis
Po koncu programa se rezultati samodejno shranijo, krivulja ojačanja pa se analizira. Krivulja ojačanja je nastavljena na privzeti prag instrumenta.
【Explanation of test resuje 】
1. Določite veljavnost poskusa: kanal FAM, VIC pozitivne kontrole mora imeti tipično krivuljo ojačanja, vrednost Ct pa je na splošno nižja od 34, vendar lahko niha zaradi različnih nastavitev praga različnih instrumentov. Negativni kontrolni kanal FAM, VIC mora biti neojačani Ct. Dogovorjeno je, da morajo biti zgornje zahteve izpolnjene hkrati, sicer je ta test neveljaven.
2. Ocena rezultata
| kanal FAM/VIC | Rezultat sodbe |
| Ct＜37 | Test vzorca je pozitiven |
| 37≤Ct<40 | Krivulja ojačanja je v obliki črke S in sumljive vzorce je treba ponovno pregledati; če so rezultati ponovnega pregleda skladni, se oceni kot pozitiven, sicer pa kot negativen |
| Ct≥40 ali brez ojačanja | Test vzorca je negativen (ali pod spodnjo mejo detekcije kompleta) |
Opomba: ( 1) Če sta kanal FAM in kanal VIC hkrati pozitivna, je SARS-Cov-2 določen kot pozitiven.
(2) Če je kanal FAM ali kanal VIC pozitiven, drugi kanal pa negativen, je treba test ponoviti. Če je hkrati pozitiven, bo ocenjen kot pozitiven na SARS-Cov-2, sicer bo ocenjen kot negativen na SARS-Cov-2.
Sorodni izdelki
-
Komplet za odkrivanje protiteles IgM/IgG proti COVID-19
Komplet za odkrivanje protiteles COVID-19 IgM/IgG (metoda imunokromatografije koloidnega zlata) Priročnik za izdelek 【IME PROIZVODA】Komplet za odkrivanje protiteles COVID-19 IgM/IgG (metoda imunokromatografije koloidnega zlata) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet, 10 testov/komplet 【 POVZETEK】 Novi koronavirusi spadajo v rod β. COVID-19 je akutna nalezljiva bolezen dihal. Ljudje smo na splošno dovzetni. Bolniki, okuženi z novim koronavirusom, so trenutno glavni vir...
-
Komplet za ekstrakcijo ali čiščenje nukleinske kisline
Komplet za ekstrakcijo ali čiščenje nukleinske kisline ali shranjen pri -20 ℃. Vzorec je treba prevažati z zvijanjem pri 0 ℃. Uvod Komplet za ekstrakcijo ali čiščenje nukleinske kisline (metoda z magnetnimi kroglicami) je zasnovan za avtomatizirano čiščenje RNK in DNK iz telesnih tekočin (kot so brisi, plazma, serum) z avtomatiziranimi instrumenti za ekstrakcijo nukleinske kisline. Tehnologija magnetnih delcev zagotavlja visokokakovostno DNA/RNA, ki je primerna za ...
-
Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2 （Imunokromatogram...
Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2 （Imunokromatografska metoda) Priročnik za izdelek 【IME PROIZVODA】Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2 （Imunokromatografska metoda) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet 【POVZETEK】 Novi koronavirusi spadajo v rod β. COVID-19 je akutna nalezljiva bolezen dihal. Ljudje smo na splošno dovzetni. Bolniki, okuženi z novim koronavirusom, so trenutno glavni...
-
Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2
Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2 （Imunokromatografska metoda) Priročnik za izdelek 【IME PROIZVODA】Komplet za testiranje antigena SARS-CoV-2 （Imunokromatografska metoda) 【SPECIFIKACIJE PAKIRANJA】 1 test/komplet, 25 testov/komplet, 100 testov/komplet 【POVZETEK 】 The novi koronavirusi spadajo v rod β. COVID-19 je akutna nalezljiva bolezen dihal. Ljudje smo na splošno dovzetni. Trenutno so glavni vir okužb bolniki, okuženi z novim koronavirusom; asimptomatski okuženi ljudje...